如何確保固相多肽合成（SPPS）中的最佳肽純度和產量

01/

如何測定肽純度

02/

不同標準下肽純度的應用

低純度（>50%）：該水平適用于先導化合物的高通量篩選。如果您正在研究免疫應答，除去特定的污染物，>70%可以用于抗原制備。

中等純度（>70%）：該水平足以生產、純化和測試免疫測定中使用的抗體、進行酶底物研究、表位作圖、親和純化、生物測定或其他免疫學應用以及肽篩選。生物化學和半定量應用可能需要達到>85%的純度。例如酶學、表位作圖或研究生物活性、酶-底物相互作用、磷酸化作用和蛋白質印記或細胞黏附中的肽封閉等。

高濃度（>90%）：該水平適用于定量生物測定、定量體外受體-配體相互作用研究、配體結合的生物活性研究、定量阻斷和競爭性抑制試驗、定量磷酸化和蛋白水解研究、電泳標記和色譜標準分析。

極高純度（>98%）：該純度適用于肽作為藥物進行體內研究、臨床試驗、藥物測試以及結構活性關系研究。

03/

優化合成以達到所需濃度

序列分析：例如使用軟件在合成之前進行合成預測，以確定在整個合成過程中是否存在合成難度很大的區域。

副反應風險評估：例如外消旋化。有許多策略可以降低副反應的風險或有助于提高單個偶聯反應的效率，包括偽脯氨酸、二肽構建塊、添加劑以及替代側鏈保護。

樹脂選擇：SPPS通常在與1%二乙烯基苯（DVB）交聯的聚苯乙烯上進行。替代品包括聚乙二醇（PEG）衍生物，樹脂的選擇會影響合成成功率和粗品的純度。連接到柱上的連接物提供生長肽和固相載體之間的可逆連接，并確定最終產物的性質和可使用的化學性質。接頭的選擇決定了最終產物中的C端官能團。

 偶聯化學：選擇通常取決于合成速度，較快的合成需要比較慢的合成（DIC、HBTU）更高反應性（=不穩定）的偶聯試劑（HCTU、HATU和COMU）。反應溫度會影響偶聯化學的選擇。

反應溫度：提高溫度可能會加快合成并提高純度，但并不總是如此。需要注意的是，基于微波的加熱只是加熱，微波本身對合成沒有特殊影響。

監控脫保護：能夠通過實時紫外監測來監控，例如脫保護步驟的效率對于優化是非常重要的。

 雙重耦合：預測軟件確定的困難耦合可以通過雙重耦合、延長耦合時間或添加更多等效物來處理。

空間位阻：偶聯試劑必須足夠快速，以便可以引入空間位阻氨基酸。

封端：這樣做是為了在偶聯反應后永久阻斷任何未反應的氨基，或使完整肽的N-末端乙酰化。它對于在合成困難或長肽期間最小化缺失產物和輔助純化過程是有很用的。

溶劑使用：始終使用新鮮溶劑。重復使用溶劑會降低純度。

04/

選擇一種能夠快速合成高純度肽的多肽合成儀